“動物組織中豬瘟病毒和偽狂犬病毒熒光定量PCR檢測技術”研究取得重要進展 (2006-01-11)
發布時間:2007-12-04
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由武漢大學病毒學國家重點實驗室承擔的國家“十五”重大科技專項“食品安全關鍵技術”課題“動物組織中豬瘟病毒和偽狂犬病病毒熒光定量PCR檢測技術”研究取得重要進展。通過將PCR技術、熒光能量共振轉移和核酸雜交技術相結合,建立了靈敏度高、特異性強、重復性好、能進行高通量病毒核酸定量的檢測技術,達到了課題的預期目標,為廣泛開展食品安全關鍵技術中豬瘟病毒和偽狂犬病病毒定量檢測技術構建了穩定性、通用性高技術創新平臺。
采用數據庫序列搜索和同源性分析,選取相應的靶序列,設計出PCR引物和探針,經實驗優化、驗證和重復實驗,建立了豬瘟病毒和偽狂犬病毒熒光定量的PCR檢測技術,進行了方法的特異性、敏感性和重復性實驗評價。該方法定量檢測的線性范圍為101-108拷貝病毒核酸分子,最小檢測限為10拷貝。與傳統病毒檢測方法對比研究證實,熒光定量PCR檢測技術比傳統的病毒分離和生物學試驗、電鏡觀察、免疫熒光技術、補體結合試驗、核酸雜交和聚丙烯酰胺凝膠電泳等檢測方法的靈敏度提高了2至3個數量級,重復性檢測的變異系數CV小于5%。熒光定量PCR檢測技術具有耗時短、步驟簡單、高通量和定量檢測病毒等特點,適用于動物組織中豬瘟病毒和偽狂犬病毒的快速定量檢測,實現病毒檢測技術的定量化、標準化和科學化。該檢測技術已獲得國家發明專利1項,申報國家發明專利1項。